ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI

LAPORAN PRAKTIKUM

FITOKIMIA

PERCOBAAN KE 4

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI

Nama                                       : Lusiana Danis Pramesti

NIM                                          : 1606067071

Kelompok                                : A3

Hari, Tanggal Praktikum        : Sabtu, 21 April 2018

Dosen Pembimbing                 : Erma Yunita, M.Sc., Apt

LABORATURIUM FITOKIMIA

AKADEMI FARMASI INDONESIA YOGYAKARTA

2018

HALAMAN PENGESAHAN DAN PERNYATAAN

Laporan Praktikum FITOKIMIA Percobaan Ke 4 dengan Judul ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PIPERIN DARI FRUCTUS PIPERIS NIGRI adalah benar sesuai dengan hasil praktikum yang telah dilaksanakan. Laporan ini saya susun sendiri berdasarkan data hasil praktikum yang telah dilakukan.

Dosen Pembimbing, Erma Yunita, M.Sc., Apt

Yogyakarta, 4 Mei 2018 Mahasiswa, Lusiana Danis Pramesti

Data Laporan (Diisi dan diparaf oleh Dosen/Laboran/Asisten)

Hari, Tanggal Praktikum	Hari, Tanggal Pengumpulan Laporan
Sabtu, 21 April 2018	Sabtu, 4 Mei 2018

Nilai Laporan (Diisi oleh Dosen)

No.	Aspek Penilaian	Nilai
1.	Ketepatan waktu pengumpulan (10)
2.	Kesesuaian laporan dengan format (5)
3.	Kelengkapan dasar teori (15)
4.	Skematika kerja (10)
5.	Penyajian hasil (15)
6.	Pembahasan (20)
7.	Kesimpulan (10)
8.	Penulisan daftar pustaka (5)
9.	Upload data via blog/wordpress/scribd/ academia.edu (10)
TOTAL

LAPORAN PRAKTIKUM

FITOKIMIA

Percobaan 4

Isolasi dan Identifikasi Piperin dari Piperis Nigri Fructus

       I.            Judul Praktikum

Isolasi dan Identifikasi Piperin dari Piperis Nigri Fructus

    II.            Tujuan Praktikum

Mahasiswa dapat memahami prinsip dan melakukan isolasi piperin dari Piperis nigri Fructus atau Piperis albi Fructus beserta analisis kualitatif hasil isolasi dengan metode kromatografi lapis tipis.

 III.            Dasar Teori

1.      Lada Hitam (Piperis nigri Fructus)

Kedudukan tanaman Lada hitam (Piper nigrum L.) dalam taksonomi (Tjitrosoepomo, 1998) :

Kingdom : Plantae

Divisio : Spermatophyta

Subdivisio : Angiospermae

Classis : Dicotyledonae

Sub Classis : Monochlamidae (Apetalae)

Ordo : Piperales

Familia : Piperaceae

Genus : Piper

Species : Piper nigrum L.

Lada atau yang disebut juga merica (Piper nigrum L.) berasal dari famili Piperaceae (Vasavirama dan Upender, 2014). Pada umumnya lada hitam (black pepper) dimanfaatkan sebagai bumbu dapur, sama halnya dengan lada putih (white pepper). Lada putih diperoleh dari buah lada hitam yang buah-buahnya dipetik selagi masih hijau atau hampir masak, direndam untuk memudahkan pengupasan lapisan luar perikarp, lalu dijemur sampai kering (Kartasapoetra, 2004).

Buah lada hitam mengandung alkaloid dan minyak atsiri dengan komponen felandren, dipenten, kariopilen, entoksilen, dan limonen (Depkes RI, 1980). Lada hitam juga mengandung antara lain alkaloid piperin (5,3-9,2%), kavisin (sampai 1%) dan metil-pirolin; minyak atsiri (1,2-3,5%); lemak (6,5-7,5%); pati (36-37%) dan serat kasar (±14%) (Loo, 1987). Buah lada putih mengandung alkaloid seperti piperin, kavisin, dan metilpirolin, serta minyak atsiri, lemak dan pati. Kandungan utama dalam lada adalah alkaloid piperin.

2.      Piperin

Kandungan utama dalam lada adalah alkaloid piperin. Piperin memiliki rumus molekul C17H19NO3 atau (E,E)-1-[5-(1,3-benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil] piperidin, diperoleh dalam bentuk prisma monosiklik dari alkohol dengan titik lebur 130°C, 1 g piperin larut dalam 15 mL etanol, 36 mL eter dan hampir tidak larut dalam air (Kar, 2014). Piperin berbentuk kristal berwarna putih kekuningan dan merupakan alkaloid dari golongan piperidin yang memiliki sifat hampir tidak larut dalam air (40 mg/L pada suhu 18°C), namun mudah larut dalam alkohol (1 g/15 mL) dan eter (1 g/1,7 mL) (Vasavirama dan Upender, 2014).

Piperin memiliki khasiat sebagai antiinflamasi, antimalaria, menurunkan berat badan, menurunkan demam, menetralkan racun bisa ular, antiepilepsi, membantu meningkatkan penyerapan vitamin tertentu (Kolhe et al., 2009). Piperin memiliki aktivitas sebagai analgesik dan antipiretik pada tikus, dan menunjukkan hasil yang sebanding dengan indometasin sebagai obat standar (Sabina et al., 2013). Kualitas ekstrak buah lada dipengaruhi oleh kandungan dan kadar senyawa kimia di dalamnya. Proses ekstraksi buah lada hitam dalam skala industri digunakan pelarut etanol 60% (Agoes, 2009). Senyawa piperin merupakan senyawa identitas yang paling banyak terkandung dalam buah lada serta memiliki beragam khasiat pengobatan, maka perlu dipisahkan secara selektif melalui penyarian atau ekstraksi. Proses isolasi piperin dari ekstrak lada hitam dapat dilakukan dengan metode rekristalisasi yang berarti pembentukan kristal kembali (Harbone, J.B., 1987).

3.      Alkaloid dan Identifikasi Alkaloid

Alkaloid adalah suatu golongan senyawa yang tersebar luas hampir pada semua  jenis tumbuhan. Semua alkaloid mengandung paling sedikit satu atom nitrogen yang biasanya bersifat basa dan membentuk cincin heterosiklik (Harborne, 1984). Alkaloid dapat ditemukan pada biji, daun, ranting dan kulit kayu dari tumbuh-tumbuhan.  Kadar alkaloid dari tumbuhan dapat mencapai 10-15%. Alkaloid kebanyakan bersifat  racun, tetapi ada pula yang sangat berguna dalam pengobatan. Alkaloid merupakan  senyawa tanpa warna, sering kali bersifat optik aktif, kebanyakan berbentuk kristal  tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotin) pada suhu kamar (Sabirin,  et al.,1994).

Garam alkaloid dan alkaloid bebas biasanya berupa senyawa padat, berbentuk  kristal tidak berwarna (berberina dan serpentina berwarna kuning). Alkaloid sering  kali optik aktif, dan biasanya hanya satu dari isomer optik yang dijumpai di alam,  meskipun dalam beberapa kasus dikenal campuran rasemat, dan pada kasus lain satu  tumbuhan mengandung  satu isomer  sementara  tumbuhan  lain  mengandung  enantiomernya (Padmawinata, 1995).

Sebagian besar alkaloid mempunyai rasa yang pahit. Alkaloid juga mempunyai sifat  farmakologi. Sebagai contoh, morfina sebagai pereda rasa sakit, reserfina sebagai  obat penenang, atrofina berfungsi sebagai antispamodia, kokain sebagai  anestetiklokal, dan strisina sebagai stimulan syaraf (Ikan, 1969).

4.      Soxchlet

Merupakan metode ekstraksi yang memanfaatkan pemanasan untuk destilasi pelurut sehingga terjadi sirkulasi pelarut melalui serbuk simplisia. Metode ini efisiensi dalam pemanfaatan pelarut tetapi berisiko pembentukan artefak akibat penggunaan panas. Pelarut yang digunakan pada metode Soxhlet minimal cukup untuk 2 kali penyarian. Proses ekstraksi dengan Soxhlet dihentikan apabila warna pelarut yang ada didalam Soxhlet sama seperti warna pelarut awalnya.

Metode ekstraksi yang dipilih untuk mengekstraksi adalah metode yang cocok dengan sifat bahan yang digunakan. Metode ekstraksi dengan alat sokhlet merupakan salah satu metode yang cocok untuk mengekstraksi alkaloid (Harbone, 1996). Penggunaan pelarut yang ideal untuk mengekstraksi adalah pelarut yang menunjukkan selektivitas maksimal, mempunyai kapasitas terbaik, dan kompatibel dengan sifat bahan yang diekstraksi (Agoes, 2007). Penggunaan cairan pelarut pengekstraksi berupa campuran etanol-air mengandung air yang cukup untuk membantu proses difusi pelarut ke dalam sel. Proses difusi biasanya akan ditingkatkan apabila sel tanaman mengalami perlakuan dengan air, atau pelarut yang mengandung air, yang akan menyebabkan terjadinya pengembangan (swelling) sel sehingga terjadi peningkatan permeabilitas atau pecahnya dinding sel (Agoes, 2009).

5.      Isolasi Piperin

Proses isolasi piperin dari ekstrak lada hitam dapat dilakukan dengan metode rekristalisasi. secara harfiah rekristalisasi berarti pembentukan kristal kembali. Ekstrak yang pekat mungkin mengkristal bila didiamkan. Bila hal ini terjadi ektrak harus disaring dan keseragamannya diuji dengan kromatografi dengan menggunakan beberapa pengembangan (Harborne. J.B., 1987).

Identifikasi piperin yang diperoleh dilakukan dengan cara membandingkan spot isolat yang didapat dengan standar piperin yang ada. hasil yang baik secara visual atau pengamatan UV memperlihatkan spot yang sama. untuk lebih meyakinkan lagi dapat dilakuan dengan KLT densitometri dengan melihat nilai Rf dan panjang gelombang maksimum.

6.      Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi adalah suatu nama yang diberikan untuk teknik pemisahan tertentu. Pada dasarnya semua cara kromatografi menggunakan dua fase yaitu fasa tetap (stationary) dan fasa gerak (mobile), pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fasa tersebut.

Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari fasa tetap, yang dapat berupa zat padat atau zat cair. Jika fasa tetap berupa zat padat maka cara tersebut dikenal sebagai kromatografi serapan, jika zat cair dikenal sebagai kromatografi partisi. Karena fasa bergerak dapat berupa zat cair atau gas maka semua ada empat macam sistem kromatografi yaitu kromatografi serapan yang terdiri dari kromatografi lapis tipis dan kromatografi penukar ion, kromatografi padat, kromatografi partisi dan kromatografi gas-cair serta kromatografi kolom kapiler (Hostettmann, K., dkk., 1995).

 IV.            Alat dan Bahan

1.      Alat

a.       Alat Penyari Soxchlet

b.      Seperangkat alat KLT

2.      Bahan

a.       Piper nigrum

b.      Etanol 96%

c.       KOH-etanolik 10%

d.      Diklormetana

e.       Etil Asetat

    V.            Cara Kerja

1.      Ekstraksi dan Isolasi

Timbang 30 gram serbuk merica, masukkan ke dalam alat penyari soxhlet yang telah dipasang kertas saring, kemudian tambahkan etanol 96% paling sedikit sebanyak 2 kali sirkulasi (± 120 ml). Jangan lupa untuk menambahkan batu didih. Penyarian dilakukan selama 2 jam dengan kecepatan 6-8 sirkulasi per jam. Setelah dingin, pisahkan sari dari bagian yang tidak terlarut dengan penyaringan melalui kertas saring. Filtrat yang diperoleh diuapkan di atas penangas air sampai kering atau konsistensi kental. Kemudian tambahkan 10 ml KOH-etanolik 10% sambil diaduk-aduk sehingga timbul endapan. Setelah mengendap, pisahkan sari dari bagian yang tidak larut melalui glass wool. Sari jernih yang didapat didiamkan dalam almari es sampai hari praktikum yang akan datang, atau sampai pembentukan kristal optimal.

2.      Pemurnian

Kristal yang timbul dipisahkan, dicuci dengan etanol 96% (dingin) dan dikeringkan dalam almari pengering pada suhu 40ᴼC selama 30-45 menit kemudian disimpan dalam eksikator yang dilengkapi kapur tohor. Kristal yang diperoleh ditimbang dan diidentifikasi dengan KLT.

3.      Identifikasi Hasil Isolasi

Ambil sedikit padatan dengan ujung spatel kecil, larutkan dalam etanol. Larutan siap dianalisis secara kualitatif dengan kromatografi lapis tipis dengan kondisi sebagai berikut:

a. Fase diam : Silika gel GF 254

b. Fase gerak : Diklormetana : Etil asetat (75:25)

c. Cuplikan : Larutan sampel

d. Deteksi : UV 254, disemprot dengan anisaldehid asam sulfat dan dipanaskan 110ᴼC selama 10 menit

Catat harga Rf yang diperoleh

 VI.            Hasil Praktikum

Nama simplisia : Piperis nigri Fructus

Metode ekstraksi : Soxchletasi

Jumlah pelarut yang digunakan : Etanol 96 % sebanyak 300 ml

Jumlah siklus : 3 siklus

Rendemen : tidak dapat dihitung karena ekstrak tidak terbentuk

VII.            Pembahasan

            Salah satu teknik pemisahan yang sering digunakan adalah ekstraksi. Ekstraksi adalah salah satu metode pemisahan kimia untuk memisahkan atau menarik suatu komponen-komponen kimia yang berada dalam sampel dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Metode ekstraksi yang dipilih untuk mengekstraksi adalah metode yang cocok dengan sifat bahan yang digunakan.

Pada percobaan ini dilakukan isolasi piperin dari simplisia lada hitam (Piperis nigri Fructus) dengan menggunakan alah soxchlet. Metode ini merupakan salah satu metode yang cocok untuk mengekstraksi alkaloid (Harbone, 1996). Sampel yang akan diekstraksi harus dalam keadaan halus untuk mempercepat proses pelarutan dari pelarut etanol yang digunakan.

            Simplisia dibungkus dengan kertas saring dan dijahit dengan benang masih tersisa seperti teh celup untuk mempermudah pengambilan. Setelah itu dimasukkan dalam timbal pada alat soxchlet dan ditambahkan etanol 96% sebanyak 300 ml sampai di labu alas bulat alat soxchle dan alat soxchlet dinyalakan. Uap yang terbentuk anak naik melewati pipa F dan masuk ke kondensor untuk didinginkan menjadi tetesan yang akan menetes pada sampel. Saat pearut memenuhi simplisia dan sifon penuh, makan sifon akan mengalirkan pelarut ke labu alas bulat lagi, ini yang dinamakan satu siklus. Pada praktikum dilakukan penyarian dengan 3 siklus.

Hasil ekstraksi kemudian dipekatkan di rotary evaporation kurang lebih 45 menit kemudian diangkat dan ditambahkan KOH-etanolik 10% sebanyak 10 ml untuk memisahkan senyawa resin dan mempermudah pengkristalan. Setelah itu disaring, ditempatkan di beaker glass ditutup dengan kertas alumunium foil dan dimasukkan dalam kulkas agar terbentuk kristal. Tahap ini dinamakan rekristalisasi. Setalah 3 hari ekstrak disari dan hasilnya tidak terbentuk kristal pada ekstrak yang dibuat dikarenakan kurang lamanya ekstrak di rotary evaporation sehingga ektrak tidak tersari sempurna dan uji isolasi tidak dapat dilakukan.

VIII.            Kesimpulan

            Berdasarkan hasil praktikum dapat disimpulkan bahwa isolasi piperin lada hitam menggunakan soxchlet tidak dapat diidentifikasi dikarenakan kurang pekatnya ekstrak sehingga tidak terbentuk kristal pada rekristalisasikarena penyarian kurang maksimal.

 IX.            Daftar Pustaka

Agoes, G., 2007, Teknologi Bahan Alam, Penerbit ITB, Bandung, 32-35.

Agoes, G., 2009, Teknologi Bahan Alam, Edisi revisi, Penerbit ITB, Bandung, 37 dan 85.

Depkes RI., 1980, Materia Medika Indonesia. Jilid IV, Jakarta: Badan Pengawas Obat dan

Makanan, 99-108.

Harborne, J.B., 1996, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan,

Terjemahan: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Penerbit ITB, Bandung.

Harbone, J.B., 1987, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan, Terbitan Kedua. Bandung: ITB

Harborne, J.B., 1984. Phitochemical Method. Chapman and Hall ltd. London.  Herbert,

R.B., 1989. The Biosynthesis of Secondary Metabolism. Campman and Hall

29 West 35^th Street, New York.

Hikmawati, Ni Putu Ermi dkk. 2016. Kandungan Piperin Dalam Ekstrak Buah Lada Hitam

dan Buah Lada Putih (Piper nigrum, L.) Yang Diekstraksi Dengan Variasi Konsentrasi Etanol Menggunakan Metode KLT-Densitometri. Media Farmasi. Vol. 7. No.2. September 2016 : 173-185

Hostettmann, K., dkk., 1995, Cara Kromatografi Preparatif, Penerbit ITB, Bandung.

Ikan, R. 1969. Natural Product A Laboratory Guide. Jerussalem: Israel Universities 

Press.

Insanu, Muhammad dkk. 2017. Perbandingan Aktivitas Antioksidan Dari Ekstrak Daun

Empat Tanaman Marga Piper. Jurnal Pharmaciana Vol.7. No.2. November 2017. Hal 305-312

Kartasapoetra, G., 2004, Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat, Jakarta: PT Rineka Cipta,

50-51.

Kolhe, S.R., Borole, P., and Patel, U., 2011, Extraction and Evaluation of Piperine from

Piper nigrum, Internasional Journal of Applied Biology and Pharmaceutical

Technology, 144-149.

Loo, T., 1987, Ikhtisar Ringkas dari Dasar-Dasar Farmakognosi, Bunda Karya, Jakarta,

181.

Padmawinata, K. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: Penerbit  ITB

(Terjemahan dari Robinson, T. 1991. The Organic Constituens of Higher  Plant, 6th

ed).

Sabina, E.P., Nasreen, A., Vedi, M., and Rasool, M., 2013, Analgesic, Antipyretic and

Ulcerogenic Effects of Piperine: An Active Ingredient of Pepper, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 5 (10): 203-206.

Sabirin, M., Hardjono S., dan Respati S., 1994. Pengantar Praktikum Kimia Organik II.

UGM-Yogyakarta.

Tjitrosoepomo, H.S. 1998. Botani Umum. UGM Press. Yogyakarta.

Vasavirama, K.and Upender, M., 2014, Piperine: A Valuable Alkaloid from Piper Species,

            International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 6 (4): 34-38.